簡(jiǎn)要說明

YM4271菌株，MATa型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通過mating操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫試驗(yàn)。Transformation marker為：trp1，leu2，ura，報(bào)告基因?yàn)椋?HIS3?？捎糜诮湍鸽p雜，酵母單雜或異源蛋白表達(dá)等試驗(yàn)。YM4271感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說明

1、取需轉(zhuǎn)化質(zhì)粒5µg，酶切，回收；

2. 取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預(yù)冷的線性質(zhì)粒1-5µg（體積不高于15 µl），酵母促轉(zhuǎn)化劑10µl，100µl冰上融化的KM71感受態(tài)細(xì)胞，畢赤酵母轉(zhuǎn)化液500µl，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3. 30℃水浴30min，每15min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

4. 每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，也可不做）

5. 42℃水浴15min，每7.5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

6. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，每支加1ml的YPGPlus（或YPG）于30℃復(fù)蘇1h；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，也可不做）

7. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)3-7d。

注意事項(xiàng)

1、使用酵母促轉(zhuǎn)化劑前，請(qǐng)把裝有酵母促轉(zhuǎn)化劑的管子在沸水中 煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.轉(zhuǎn)化液低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫下溶解后使用。

3.轉(zhuǎn)化全程要無菌操作。