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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:SURE Chemically Competent Cell / Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:SURE
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-21
  • 訪  問  量:284

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG017-50
規(guī)格50支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

SURE Chemically Competent Cell

基因型:

E.coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5(Kanr) uvrC [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)].

簡要說明:

真核生物DNA存在較多“十字型"、“Z字型"等二級或三級結(jié)構(gòu),這種DNA結(jié)構(gòu)在利用傳統(tǒng)大腸桿菌進(jìn)行克隆時易被大腸桿菌體內(nèi)的重組酶系統(tǒng)或其他防御系統(tǒng)識別并對其進(jìn)行重組,刪除等破壞,導(dǎo)致很難對這類DNA進(jìn)行正確的克隆操作。SURE菌株可以解決這些問題:此菌株體內(nèi)重組酶系統(tǒng)整條通路被破壞,并且(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-) 這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外源DNA進(jìn)行標(biāo)記、限制的能力,提高了外源甲基化DNA的克隆效率,同時具有核酸酶(endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變,增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性。存在于F′因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選;Kanr,Tetr賦予菌株KA那霉素和四環(huán)素抗性。High5TM系列SURE感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)5×108cfu/μg。

操作說明:

1.SURE感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手輕輕打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項:

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

3.操作過程中勿將感受態(tài)暴露于氧化性環(huán)境中,例如超凈臺應(yīng)將臭氧排凈后再使用。

4.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

5. 此菌株具有KA 那霉素,四環(huán)素抗性,擁有這兩種抗性的質(zhì)粒無法使用;對<40 µg/mlLU霉素有抗性,但對100µg/mlLU霉素敏感。使用其他抗生素參考濃度:氨芐QIN霉素(終濃度: 100 µg/ml),LU霉素(終濃度:100 µg/ml)。

6.High5TM系列SURE感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×108cfu/μg。 ;如果有更高要求,可嘗試Stratagene公司推薦的標(biāo)準(zhǔn)protocol。





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