亚洲av永久无码精品天堂d2,人妻精品久久无码专区精东影业,天天躁日日躁aaaaxxxx,亚洲熟妇av一区

咨詢熱線

18019981829

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  酵母感受態(tài)細(xì)胞的操作說明及注意事項(xiàng)

酵母感受態(tài)細(xì)胞的操作說明及注意事項(xiàng)

更新時間:2024-11-12      點(diǎn)擊次數(shù):587
質(zhì)粒pYES2的篩選標(biāo)志為URA,可用SD-URA板板進(jìn)行篩選。BY4742感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pYES2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。
操作說明:
1、取一支無菌的1.5mlEP管,依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3µg,Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴,重復(fù)一次),100µl冰上融化的AH109感受態(tài)細(xì)胞,PEG/LiAc500µl,輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次; 
2、30℃水浴30min,每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次;
3、每支加入20µl的二甲基亞砜;(用于提高轉(zhuǎn)化效率,可不做)
4、42℃水浴15min,每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次;
5、12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1ml的YPDPlus于30℃復(fù)蘇1h;(用于提高轉(zhuǎn)化效率,可不做)
6、12000rpm瞬時離心棄上清,用100µl0.9%NaCl重懸,涂板,30℃培養(yǎng)48-96h。
注意事項(xiàng):
1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2、若使用pYES2質(zhì)粒表達(dá)蛋白,需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖(篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖;當(dāng)需要目的蛋白表達(dá)時,需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源),以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。
3、轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4、同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。
5、酵母為真核生物,不易長期保存,隨感受態(tài)在-80℃保存時間的延長,轉(zhuǎn)化效率會不斷下降,建議保存時間不超過90天。
6、BY4742酵母菌株對高溫敏感,適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。
7、酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢,培養(yǎng)基中缺陷成分越多,生長越慢,以轉(zhuǎn)化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48h培養(yǎng)可見直徑1mm克??;涂SD單缺平板29℃,48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。
 

聯(lián)系我們

合肥恩派爾貿(mào)易有限公司 公司地址:安徽省合肥市高新區(qū)黃山路624號桑夏精英時代廣場507室   技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)
  • 聯(lián)系人:李女士
  • QQ:3644884546
  • 公司傳真:4009005473
  • 郵箱:sale@abnbio.com

掃一掃 更多精彩

公眾號

小程序

国产精品V欧美精品∨日韩| 精品日本一区二区三区在线观看| 国产一区二区三区久久精品| 国产精品美女久久久| 久久精品国产亚洲av无码麻豆| 国产香蕉尹人视频在线| 乱中年女人伦av三区| 国产熟妇另类久久久久| 午夜不卡av免费| 妈妈的朋友中文字幕| 国产精品久久国产精品99| 医院人妻闷声隔着帘子被中出| 99久久99久久久精品齐齐| 人妻少妇被猛烈进入中文字幕| 强开美妇后菊哀嚎哭叫视频 | 久久精品国产亚洲av无码麻豆 | 婷婷综合久久狠狠色99H| 精品国产天线2019| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产高潮国产高潮久久久 | 男男啪啪激烈高潮cc漫画免费| free性丰满hd性欧美| 无码国产av精品一区二区| 国产精品成人69xxx| 午夜欧美精品久久久久久久| 亚洲国产精品毛片av不卡在线| 久久人做人爽一区二区三区| 亚洲一区二区三区在线观看网站| 国产精品无码翘臀在线观看| 中文字幕乱码人妻一区二区三区| 天天干天天射天天操| 色婷婷综合久久久久中文 | 亚洲国产精品尤物yw在线观看| 精品久久久久久久无码| 亚洲成av人片在www色猫咪| 欧美老妇交乱视频| 粗大的内捧猛烈进出的视频| 被几个人摁住玩弄隐私作文| 天堂网在线观看| 不用播放器的av| 国产精品v欧美精品v日韩精品 |